ГОСТ 9.085-78

Группа Т99

     
     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


Единая система защиты от коррозии и старения

ЖИДКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩИЕ

Методы испытаний на биостойкость

Single corrosion and ageing protection system.
Cooling lubricant. Bioresistance test methods

     
     
МКС 19.040
         75.100     
ОКСТУ 0009

Дата введения 1979-07-01

     Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. N 1699 дата введения установлена с 01.07.79
     
     Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)
     
     ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в октябре 1988 г. (ИУС 1-89)
     
     
     Настоящий стандарт распространяется на водосмешиваемые смазочно-охлаждающие жидкости (далее СОЖ) и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий и плесневых грибов.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     

1. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

     
     1.1. Сущность метода
     
     Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами бактерий в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.
     
     1.2. Отбор проб
     
     1.2.1. Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ 2517-85 массой 50 г.
     
     1.2.2. Пробами являются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и стерилизации.
     
     1.2.3. Проб должно быть не менее трех.
     
     1.2.4. Виды бактерий
     
     1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов бактерий:
     
     Escherichia coli (Migyla) Castellani and Chalmers;
     
     Mycobacterium phlei Lehman and Neum;
     
     Pseudomonas aeruginosa Migyla;
     
     Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;
     
     Staphylococcus aureus Rosenbach.
     
     Кроме чистых культур допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из испытуемых СОЖ.
     
     1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.
     
     1.2.4.1, 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий производят, как указано в ГОСТ 9.082-77.
     
     1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89 со следующим дополнением:
     
     термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры (30±2) °С*;
     
     электроплитка с закрытой спиралью*;
     
     потенциометр по ГОСТ 9245-79;
     
     горелки газовые*;
     
     цилиндры металлические, полые изготовленные из коррозионно-стойкой стали по ГОСТ 5949-75, внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;
     
     чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336-82 с крышками, низкие, типа ЧБН;
     
     груша резиновая*;
     
     доска для сушки посуды;
     
     аппарат для встряхивания колб и пробирок;
     
     стандарты мутности;
     
     рН-метр лабораторный типа ЛПУ-01, рН-340 или другого типа с погрешностью не более 0,05 рН;
     
     ножницы, пинцеты, скальпели*;
     

     штативы лабораторные*;
     
     бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 9.082-77;
     
     агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 9.082-77;
     
     спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87, высшего сорта;
     
     кислота соляная по ГОСТ 3118-77;
     
     кислота серная по ГОСТ 4204-77;
     
     калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;
     
     натрий углекислый по ГОСТ 83-79, безводный;
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
__________________
     * По документации, утвержденной в установленном порядке.
     
     1.4. Подготовка к испытаниям
     
     1.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.
     
     1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.082-77.
     
     1.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.
     
     

Таблица 1

     
     
     1.4.4. Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082-77.
     
     1.4.5. Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в течение суток, с помощью бактериологической петли переносят в отдельные пробирки, содержащие 10 см водопроводной воды.
     
     1.4.6. Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.
     
     Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см.
     
     1.4.7. Приготовленные суспензии взбалтывают и сливают в равных объемах (1-2 см) в стерильную пробирку.
     
     1.4.8. Срок хранения суспензии не более 3 ч.
     
     1.5. Проведение испытаний
     
     1.5.1. Круглую или коническую колбу вместимостью 500 см, содержащую 200-300 см среды 1, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (100±2) °С до тех пор, пока среда полностью не расплавится.
     
     Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-50 °С и заражают суспензией смеси бактериальных культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 см на 100 см среды.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     1.5.2. Среду после заражения разливают по 15 см в чашки Петри.
     
     1.5.3. На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из которых вносят по 0,1 см испытуемой СОЖ.
     
     1.5.4. Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат при (30±2) °С.
     
     1.5.5. Пробы выдерживают в термостате 24 ч.
     
     1.5.6. Испытания повторяют 3-4 раза.
     
     1.5.7. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из термостата и осматривают.
     
     1.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.2.
     
     

Таблица 2

     
     
     1.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.023-74 со следующим дополнением: необходимо осуществлять систематический контроль загрязнения микроорганизмами воздуха в производственных помещениях.
     
     Количество микроорганизмов не должно превышать 5000-7000 кл/мвоздуха.
     
     

2. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АНАЭРОБНЫХ [СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ] БАКТЕРИЙ

     
     2.1. Сущность метода
     
     Сущность метода заключается в способности анаэробных бактерий восстанавливать соединения серы с образованием сероводорода и сульфидов металлов.
     
     Микроорганизмы образуют черные зоны сульфида железа, которые учитываются при оценке бактериостойкости СОЖ.
     
     2.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.
     
     2.2.1. Виды бактерий - культуры представителей рода Desulfovibrio.
     
     Допускается использование ассоциативных культур этих бактерий с представителями других родов - Pseudomonas, Achromobacter и др.
     
     2.3. Аппаратура, материалы и реактивы по п.1.3 со следующим дополнением:
     
     аммоний хлористый по ГОСТ 3773-72;
     
     натрий сернокислый кристаллический по ГОСТ 4171-76;
     
     железо лимоннокислое, кристаллическое, ч.д.а.*;
     
     пептон бактериологический*.
__________________
     * По документации, утвержденной в установленном порядке.
          
     2.4. Подготовка к испытаниям - по пп.1.4.1-1.4.4.
     
     2.4.1. Для приготовления бактериальной суспензии используют накопительные культуры сульфатредуцирующих бактерий, выделенные в производственных условиях из пораженных СОЖ.
     
     Для выращивания культуры используют среду 3.
     
     2.4.2. Выращенную культуру в количестве 0,1-0,2 см переносят пипеткой в отдельные пробирки, содержащие 10 см водопроводной воды.
     
     2.4.3. Количество бактериальных клеток определяют с помощью камеры Горяева.
     
     Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см.
     
     2.4.4. Срок хранения суспензии-не более 1 ч.
     
     2.5. Проведение испытаний
     
     2.5.1. Испытуемые СОЖ разливают мерной пипеткой по 8-9 см в стеклянные пробирки, добавляют по 0,5-1 см суспензии, тщательно перемешивают и закрывают притертыми пробками.
     
     2.5.2. Пробирки помещают в термостат и выдерживают при температуре (30±2) °С в течение 20-24 ч.
     
     2.5.3. По истечении указанного срока проводят заражение среды 2 испытуемой СОЖ. Для этого 1 см зараженной СОЖ вносят в стерильную пробирку и заливают 10 см предварительно расплавленной и охлажденной до 40 °С - 45  °С средой 2.
     
     2.5.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в стерильные пробирки вносят 1 см бактериальной суспензии и 10 см среды 2.
     
     2.5.5. Пробирки с зараженными пробами и контрольные пробирки закрывают притертыми пробками, перемешивают содержимое и помещают в термостат с температурой (30±2)  °С.
     
     2.5.6. Пробирки выдерживают в термостате 4 сут.
     
     2.5.7. По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и осматривают.
     
     2.5.8. Если среда 2 в контрольной пробирке остается бесцветной, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых пробах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.
     
     2.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.3.
     
     

Таблица 3

     
     
     2.5.8, 2.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     2.7. Требования безопасности - по п.1.7.
     
     

3. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

     
     3.1. Сущность метода
     
     Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами грибов в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой грибостойкости.
     
     3.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.
     
     3.2.1. Виды грибов
     
     Aspergillus niger van Thieghem;
     
     Chaetomium globosum Kunze;
     
     Cladosporium gossi picola Pidopl ct Deniak;
     
     Cladosporium resinae Albida;
     
     Penicillium chrysogenum Thom;
     
     Penicillium ochro-cloron Biorge;
     
     Trichoderma koningii Oudemans;
     
     Trichoderma viride Pers. ex. Fr;
     
     Torula convoluta Harz;
     
     Cephalosporium acremonium Corda.
     
     3.2.2. Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями.
     
     3.2.1, 3.2.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     3.2.3. Пересев, выращивание и хранение грибов - по ГОСТ 9.048-89.
     
     3.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
     
     3.4. Подготовка к испытаниям
     
     3.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.
     
     3.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89.
     
     3.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.
     
     3.4.4. Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048-89, используя грибы, приведенные в п.3.2.1.
     
     3.4.5. Приготовление суспензии спор грибов и контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048-89.
     
     3.5. Проведение испытаний
     
     3.5.1. Коническую колбу вместимостью 500 см, содержащую среду 5 в количестве 300 г, выдерживают при температуре (100±2) °С на водяной бане до полного расплавления среды.
     
     3.5.2. Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-45 °С и заражают водной суспензией спор грибов, внося последнюю с помощью градуированной пипетки - 2 см на 100 см среды.
     
     3.5.3. На застывшую строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 полых металлических цилиндра, в каждый из которых вносят по 0,1 см испытательной СОЖ.
     
     3.5.2, 3.5.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     3.5.4, 3.5.5. (Исключены, Изм. N 1).
     
     3.5.6. Чашки Петри помещают в эксикатор, на дно которого налита дистиллированная вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (28±2) °С.
     
     3.5.7. Пробы выдерживают в термостате 28 сут. Через каждые 7 сут крышку эксикатора приоткрывают на 3 мин для притока воздуха.
     
     3.5.8. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают.
     
     3.6. Оценку грибостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.4.
     
     

Таблица 4

     
     
     3.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.048-89.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Смазочные материалы, индустриальные
масла и родственные продукты.
Методы анализа: Сб. стандартов. -
М.: Стандартинформ, 2006