ГОСТ 9.082-77

Группа Т99

     
     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


Единая система защиты от коррозии и старения

МАСЛА И СМАЗКИ

Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий

Unified protection corrosion and ageing system. Oils and lubricants.
Methods of laboratory tests for resistance to bacteria action

МКС 19.040
         75.100

Дата введения 1979-01-01

     Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 5 декабря 1977 г. N 2804 дата введения установлена 01.01.79
     
     Ограничение срока действия снято Постановлением Госстандарта СССР от 22.10.90 N 2659
     
     ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в октябре 1990 г. (ИУС 1-91)
     
     
     Настоящий стандарт распространяется на масла и смазки и устанавливает исследовательские лабораторные методы испытаний на стойкость к воздействию бактерий.
     
     

1. МЕТОД 1

     
     1.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, без дополнительного источника минерального и органического питания.
     
     Метод применяют для определения бактериостойкости масел и смазок при отсутствии минеральных и органических загрязнений.
     
     1.2. Отбор образцов
     
     1.2.1. Масла и смазки отбирают по ГОСТ 2517-85 в количестве 10-15 г.
     
     1.2.2. Образцами являются масла и смазки в соответствии поставки без специальной очистки и стерилизации.
     
     1.2.3. Количество образцов должно быть не менее пяти.
     
     1.2.4. Штаммы бактерий
     
     1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь штаммов чистых культур бактерий:
     

     
     1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают во Всесоюзной коллекции микроорганизмов института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.
     
     1.2.4-1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий проводят, как указано в приложении 1.
     
     1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
     
     Масло МК-8 по ГОСТ 6457-66.
     
     Масло МС-8 рк по ОСТ 38.01387-85.
     
     Масло МС-8 п по ОСТ 38.101163-78.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     1.4. Подготовка к испытаниям
     
     1.4.1. Посуду и материалы готовят по ГОСТ 9.048-89.
     
     1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89 и приложению 2.
     
     Рецептура сред приведена в таблице.
     
     

          
     
     1.4.3. Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в приложении 1.
     
     1.4.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в чашку Петри наливают среду 4 в количестве 20-30 см и дают ей застыть.
     
     1.4.5. Для размещения образцов смазок среду 3 наливают в чашку Петри в количестве 20-30 см и дают ей застыть.
     
     1.4.6. Для размещения образцов масел готовят лунки, для чего в застывшей среде 3 стерильным сверлом диаметром 10 мм просверливают пять лунок глубиной около 5 мм.
     
     1.5. Проведение испытаний
     
     1.5.1. Суспензию бактерий готовят, как указано в приложении 3.
     
     1.5.2. Для заражения образцов используют водную суспензию смеси бактерий.
     
     1.5.3. Образцы смазок наносят скальпелем в количестве пяти кусочков размером 10х10 мм толщиной 1,5-2,0 мм на поверхность среды в чашку Петри, приготовленную, как указано в п.1.4.5.
     
     1.5.4. Образцы масел наливают в лунки (на 1 мм ниже уровня среды), приготовленные, как указано в п.1.4.6.
     
     1.5.5. Чашка Петри с образцами и контрольные чашки Петри, приготовленные, как указано в пп.1.4.4 и 1.4.5, помещают в бокс. Поверхность образцов и сред заражают водной суспензией смеси бактерий пульверизатором, не допуская слияния капель.
     
     1.5.6. Чашки Петри с зараженными образцами и контрольные чашки (п.1.4.4) помещают в эксикатор, на дно которого налита вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (29±2) °С.
     
     1.5.7. Образцы выдерживают в термостате 56 сут.
     
     1.5.8. Через 1-3 сут после начала испытаний осматривают контрольную чашку Петри.
     
     Если на поверхности среды рост бактерий и образование пигмента не наблюдается, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых образцах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.
     
     1.5.9. Через 28 сут проводят промежуточный осмотр образцов. Испытания образцов, на которых обнаруживают развитие бактерий, прекращают.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     1.5.10. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают образцы.
     
     1.6. Обработка результатов
     
     1.6.1. Образцы масел и смазок осматривают через лупу при 2,5-7-кратном увеличении.
     
     1.6.2. Масла и смазки считают бактериостойкими при отсутствии развития бактерий и пигментации на всех испытанных образцах.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     

2. МЕТОД 2

     
     2.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, на среде с дополнительным источником минерального питания.
     
     Метод применяют для определения бактериостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные загрязнения.
     
     2.2. Отбор образцов - по п.1.2.
     
     2.2.1. Виды бактерий - по п.1.2.4.
     
     2.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
     
     2.4. Подготовка к испытаниям - по пп.1.4.2-1.4.4.
     
     2.4.1. Для размещения образцов смазок среду 2 (см. табл.) наливают в чашку Петри в количестве 20-30 см и дают ей застыть.
     
     2.4.2. Для размещения образцов масел готовят лунки, как указано в п.1.4.6, используя среду 2.
     
     2.4.3. (Исключен, Изм. N 1).
     
     2.5. Проведение испытаний
     
     2.5.1. Образцы смазок наносят, как указано в п.1.5.3, на поверхность среды в чашку Петри, приготовленную по п.2.4.1.
     
     2.5.2. Образцы масел наливают в лунки, приготовленные, как указано в п.2.4.2, в соответствии с требованиями п.1.5.4.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     2.5.3. (Исключен, Изм. N 1).
     
     2.5.4. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп.1.5.5 и 1.5.6.
     
     2.5.5. Образцы выдерживают в термостате 28 сут.
     
     2.5.6. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп.1.5.8-1.5.10 с промежуточным осмотром образцов через 7-14 сут.
     
     2.6. Обработка результатов - по п.1.6.
     
     2.7. Испытание масел допускается проводить по ГОСТ 9.052-88, метод 3. Вместо культур грибов по ГОСТ 9.052-88 используют бактериальные культуры по п.1.2.4. Отбор для оценки бактериостойкости масел проводят через каждые сутки.
     
     (Введен дополнительно, Изм. N 1).
     
     

3. МЕТОД 3

     
     3.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, на среде с дополнительным источником минерального и органического питания.
     
     Метод применяют для определения бактериостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные и органические загрязнения.
     
     3.2. Отбор образцов - по п.1.2.
     
     3.2.1. Виды бактерий - по п.1.2.4.
     
     3.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
     
     3.4. Подготовка к испытаниям - по п.1.4.
     
     3.4.1. Для размещения образцов смазок готовят чашки Петри, как указано в п.2.4.1, используя среду 4.
     
     3.5. Проведение испытаний - по п.1.5.
     
     3.5.1. Образцы выдерживают в термостате в условиях, указанных в п.1.5.6, 14 сут.
     
     3.5.2. Промежуточный осмотр образцов проводят через 7 сут после начала испытаний.
     
     3.6. Обработка результатов - по п.1.6.
     
     

4. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ - по ГОСТ 9.023-74.
     

ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Обязательное

     
ПЕРЕСЕВ, ВЫРАЩИВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ

     
     1. Пересев культур бактерий
     
     1.1. Пересев культур бактерий проводят в специальном боксе, предварительно продезинфицированном.
     
     1.2. На пробирках, приготовленных для пересева, обозначают виды бактерий, ставят дату пересева, которую заносят в журнал регистрации пересева культур бактерий.
     
     1.3. Пересев культур бактерий в пробирки со стерильной питательной средой проводят при помощи бактериологической петли. Петлю изготавливают из проволоки (платина, хром, никель, молибден) диаметром (0,6±0,1) мм, длиной (120±20) мм, укрепленной в стеклянном или металлическом держателе.
     
     1.4. Пробирки, засеянные бактериями, помещают в термостат при температуре (29±2) °С и выдерживают в нем три-четыре дня до появления хорошего роста и пигментации.
     
     1.5. Чистоту выросшей культуры контролируют визуально и микроскопированием.
     
     1.4, 1.5. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     2. Выращивание и хранение культур бактерий
     
     2.1. Чистые культуры бактерий для проведения испытаний выращивают и хранят в пробирке со скошенной поверхностью питательной среды.
     
     Допускается хранить их в виде суспензии в среде 5 п.1.4.2 в пробирках под слоем минеральных масел МК-8, или МС-8рк, или МС-8п толщиной 1 см.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     2.2. Культуры бактерий пересевают в пробирки для получения музейных партий.
     
     Примечание. Музейные партии предназначены для сохранения чистых культур и получения из них рабочих партий.
     
     
     2.3. Количество музейных партий рекомендуется иметь от 3 до 5 в зависимости от объема проводимых испытаний в течение месяца.
     
     2.4. Пересев музейных культур необходимо проводить 1 раз в 3 мес.
     
     2.5. Для выращивания культур бактерий используют среду мясопептонного агара (МПА) или среду 7-БСА.
     
     2.4, 2.5. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     2.6. Пробирки с чистыми культурами бактерий хранят в холодильнике при температуре (7±3) °С.
     
     2.7. Допустимый срок хранения культур - 6 мес.
        

ПРИЛОЖЕНИЕ 2
Обязательное

     
ПРИГОТОВЛЕНИЕ МЯСО-ПЕПТОННОГО АГАРА

     
     1. Для приготовления мясо-пептонного агара (МПА) можно использовать мясо-пептонный бульон (МПБ). Основой для его приготовления является мясная вода, которую обычно готовят следующим образом: 500 г мяса, освобожденного от костей, жира и сухожилий, разрезают на мелкие куски (или пропускают через мясорубку), заливают 1 л водопроводной воды и оставляют при комнатной температуре на 12 ч, или в термостате при 30 °С на 6 ч, или при 37 °С - на 2 ч. В это время из мяса экстрагируются различные вещества, в том числе водорастворимые витамины. Затем мясо отжимают через марлю или полотно и фильтрат кипятят 5 мин. При этом свертываются белки. Остывшую массу фильтруют без перемешивания через ватный фильтр и добавляют воды до первоначального объема. К мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5% поваренной соли.
     
     2. К МПБ, бульону Хоттингера или разбавленному гидролизату Хоттингера добавляют 2-3% агар-агара. рН МПА должен быть 7±0,2. Стерилизуют при 1 атм. Стерильная среда может храниться в течение 1-2 месяцев.
     
     3. Для приготовления МПА можно также использовать бульон Хоттингера (180 мг % аминого азота) или гидролизат Хоттингера (800 мг % аминого азота). Для приготовления МПА гидролизат Хоттингера разбавляют в четыре-пять раз.
     
     

ПРИЛОЖЕНИЕ 3
Обязательное

     
ПРИГОТОВЛЕНИЕ СУСПЕНЗИЙ БАКТЕРИЙ И КОНТРОЛЬ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ БАКТЕРИЙ

     
     1. Для приготовления суспензии клеток используют культуры бактерий возрастом от 2 до 5 сут, считая с момента пересева.
     
     2. Суспензию клеток с концентрацией 1-2 млн/см готовят отдельно для каждого вида бактерий. Для этого в пробирку или колбу, содержащую (20±5) см стерильной воды, переносят клетки бактерий из пробирки с чистой культурой.
     
     3. Перенос бактериальных клеток из пробирки в колбу осуществляется захватом клеток бактериологической петлей.
     
     4. Приготовленные в соответствии с требованиями пп.1-3 суспензии бактерий смешивают в равных объемах и используют для заражения образцов.
     
     5. Срок хранения суспензии бактерий не более 4 ч с момента их приготовления.
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Смазочные материалы, индустриальные
масла и родственные продукты.
Методы анализа: Сб. стандартов. -
М.: Стандартинформ, 2006